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北京六一生物科技有限公司

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瓊脂糖水平電泳儀:什么是核酸電泳?

發(fā)布時間:2022-06-22

  瓊脂糖水平電泳儀:什么是核酸電泳?  核酸電泳通常使用瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠兩種介質(zhì)。瓊脂糖是一種聚合鏈線性分子;聚丙烯酰胺凝膠由丙烯酰胺(Acr)在 N,N,N′-四甲基乙 二胺(TEMED)和過硫酸銨(AP)的催化下聚合形成長鏈,并通過交聯(lián)劑 N,N′-亞甲雙丙烯酰胺(Bis)交叉連接而成。瓊脂糖凝膠適合分離200bp至近50kb的DN 片段,而聚丙烯酰胺凝膠對于小片段(5bp-500bp)的分離效果很好,且分辯力極高。選擇不同濃度的凝膠,可以分離丌同大小范圍的 DNA 分子。電場強度愈大,帶電顆粒的運動赹快。但凝膠的有效分離范圍隨著電壓增大而減小,所以電泳時一般采用低電壓,不超過 6V/cm。而對于大片段電泳,可以選擇 0.5-1.0V/cm 電泳過夜。如果選擇高電壓電泳,可使用聚丙烯酰胺凝膠?! 『怂犭娪境2捎肨AE、TBE、TPE三種緩沖系統(tǒng)。TAE價格低廉,但緩沖能力低。TPE在進行DNA回收時,會使DNA污染磷酸鹽,影響后續(xù)反應(yīng)。所以綜合考慮,多采用TBE緩沖液。  核酸電泳中常用的染色劑是溴化乙錠(EB)。溴化乙錠是一種扁平分子,可以嵌入核酸雙鏈的配對堿基之間。

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